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當(dāng)前位置:首頁(yè)產(chǎn)品中心蛋白質(zhì)研究蛋白質(zhì)提取BC3730磷酸化蛋白提取試劑盒

磷酸化蛋白提取試劑盒
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

磷酸化蛋白提取試劑盒用于哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取總蛋白,試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,作用較為強(qiáng)烈,可快速獲得總蛋白,可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn),由于含有上述的酶抑制劑,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。

產(chǎn)品型號(hào):BC3730

更新時(shí)間:2025-08-29

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

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磷酸化蛋白提取試劑盒

操作方法:

1、組織總蛋白的提取

1) 在 1ml 的冷裂解液中各加入 10ul 的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和 PMSF;混勻,放置在冰上 備用;

2) 稱取 0.1g 的新鮮組織,放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處,用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎,然 后加入 0.5-1ml 的新配置的裂解液,研磨直沒有明顯的組織塊,這個(gè)過(guò)程注意冰上操作;

3) 將組織勻漿液移入 1.5ml 的 EP 管中,4 ℃ 12000g 離心 30min;

4) 吸取上清新的管中;

5) 進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。 (提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復(fù)凍融,避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)

2、細(xì)胞總蛋白的提取

1) 裂解液的用量:107個(gè)細(xì)胞需要裂解液 1ml;

2) 貼壁細(xì)胞:棄去培養(yǎng)基,用冷的 PBS 洗兩次,棄去 PBS,然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液;在冰 上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞,將刮離的細(xì)胞裂解液移入 EP 管中,顛倒裂解 20-30min。

3) 懸浮細(xì)胞:4℃ 400g 離心收集細(xì)胞,用冷的 PBS 洗兩次細(xì)胞,同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液,渦旋 10s,放置冰上裂解 10min,重復(fù) 3-4 次;

4) 裂解完畢之后,將細(xì)胞裂解液 4 ℃12000g 離心 30min;

5) 將上清移入新的 EP 管中;進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。 (提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復(fù)凍融,避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)

注意事項(xiàng):

1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程,所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融,保證操作過(guò)程中的低溫環(huán)境。

2. PSMF(有毒)現(xiàn)用現(xiàn)加,因?yàn)?PMSF 在水溶液中會(huì)快速降解。

相關(guān)文獻(xiàn):

《Proanthocyanidins Protect against β-Hydroxybutyrate-Induced Oxidative Damage in Bovine Endometrial Cells》 作者:Xi Cheng,Shuhua Yang,Chuang Xu, Lanzhi Li,Yi Zhang, Yang Guo, Cai Zhang, Peng Li, Miao Long,Jianbin He 期刊:Molecules. 影響因子:3.098 PMID:30678309
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影響因子:3.361 PMID:30502652
《β?elemene inhibits oxygen?induced retinal neovascularization via promoting miR?27a and reducing VEGF expression》 作者:Weilai Zhang, Lei Chen ,Jin Geng, Limin Liu, Li Xu 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:30664207
 

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