北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC1410-50T/48S
更新時間：2024-07-09
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：2752
010-50973130
產(chǎn)品分類
超氧陰離子清除能力檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC1410
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體3mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：臨用前每瓶加6mL 蒸餾水充分溶解。2-8℃保存4周。
產(chǎn)品說明：
生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導(dǎo)的作用，但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞 作用，導(dǎo)致機體細胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。
AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－與對氨基 苯磺酰胺和α-萘 胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在530nm 處有特征吸收峰，樣品對超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負相關(guān)。注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）︰提取液體積(mL)為1︰5~10的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1 mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000 g，4℃，離心10 min，取上清，置于冰上待測。
2、液體：直接檢測。若有渾濁則離心后取上清待測。
3、細胞樣本：收集細胞到離心管內(nèi)，棄上清，按照每500萬細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細胞（功率200w，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），然后10000g，4℃，離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至530 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 操作表（1.5mLEP管）：
試劑名稱（µL） | 空白管 | 測定管 |
試劑一 | 50 | 50 |
試劑二 | 200 | 200 |
充分混勻， 25℃反應(yīng) 1min | ||
水 | 125 | - |
樣品 | - | 125 |
試劑三 | 250 | 250 |
充分混勻，37℃反應(yīng) 30min | ||
試劑四 | 250 | 250 |
試劑五 | 250 | 250 |
充分混勻， 37℃顯色 20min，吸取1mL 于1mL玻璃比色皿里，在 530nm 處測定空白管和測定管的吸光值，分別記為A空白，A測定?？瞻坠苤恍枳?/span>1-2次。 | ||
三、超氧陰離子清除能力計算
超氧陰離子清除率（%）=（A空白-A測定）÷A空白×100%
注意事項：
1、樣本制備好之后，立刻進行測定，請勿將樣本進行長時間的低溫保存，以免影響測定結(jié)果。
實驗實例：
1、 稱取0.1 g黃楊葉片組織，加入1 mL提取液，冰浴勻漿，10000 g，4℃條件下離心10 min；取上清置于冰上待測。使用1 mL玻璃比色皿，按照測定步驟操作，計算A空白=0.666，A測定=0.157,按公式計算超氧陰離子清除率=（0.666-0.157）÷0.666×100%=76.4%
2、 吸取125μl的羊血清，使用1 mL玻璃比色皿，按照測定步驟操作，計算A空白=0.666，A測定=0.193,按公式計算活性超氧陰離子清除率=（0.666-0.185）÷0.666×100%=72.22%
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