蔗糖合成酶活性檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：

儲存條件
-20℃
中文名稱
蔗糖合成酶活性檢測試劑盒
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Sucrose Synthetase (SS, Cleavage Direction) Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號：BC4310-50T/24S

更新時間：2024-04-16

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1046

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號: BC4310

規(guī)格: 50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體8 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑三	液體8 mL×1瓶	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品	粉劑×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1、試劑二：臨用前加入2.5 mL試劑一充分溶解待用，用不完的試劑建議分裝后，-20℃保存，避免反復(fù)凍融；

2、標(biāo)準(zhǔn)品：20 mg果糖，臨用前加入1 mL蒸餾水溶解，配成20 mg/mL果糖溶液備用，2-8℃保存一周。

產(chǎn)品說明：

蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代謝過程的關(guān)鍵酶，負(fù)責(zé)催化蔗糖分解與合成的可逆反應(yīng)，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG與果糖，參與淀粉、纖維素和半纖維素的合成等代謝途徑。

分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖與UDPG，果糖與3,5 -二硝基水楊酸反應(yīng)生成在540nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì)，通過測定540nm處吸光值變化可計算得SS-I活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式低溫離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，8000g，離心10min，取上清置于冰上待測。

二、測定步驟

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將20mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為5、4、3、2、1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3、操作表 (在1.5mL離心管中操作) ：

試劑名稱（µL）	對照管	測定管	標(biāo)準(zhǔn)管	空白管
樣本	20	20	-	-
標(biāo)準(zhǔn)溶液	-	-	20	-

蒸餾水	-	-	-	20
試劑一	80		80	80
試劑二	-	80	-	-
混勻，30℃水浴30 min后，95℃水浴10 min（蓋緊，防止水分散失）。
試劑三	100	100	100	100
混勻，沸水浴5 min（蓋緊，防止水分散失），冷卻至室溫。
蒸餾水	800	800	800	800
混勻，置于1mL玻璃比色皿中，測定540nm處吸光值A，分別記為A對照管，A測定管，A標(biāo)準(zhǔn)管，A空白管。計算ΔA=A測定管-A對照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管（標(biāo)準(zhǔn)曲線只需檢測1-2次）。

三、SS-I活性計算

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，其對應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA帶入方程得到x（mg/mL）。

2、 SS-I活性的計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算

酶活定義：每mg蛋白每分鐘分解蔗糖產(chǎn)生1µg果糖為1個酶活力單位。

SS-I酶活（U/mg prot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）×10³÷T = 33.33x÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計算

酶活定義：每g樣本每分鐘分解蔗糖產(chǎn)生1µg果糖為1個酶活力單位。

SS-I酶活（U/g質(zhì)量）=x×V提取×10³÷W÷T = 33.33x÷W

V提?。禾崛∫后w積，1mL；10³：單位換算系數(shù)，1mg=10³µg；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測定；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間：30min。

注意事項：

1. 當(dāng)A或ΔA超過1時，建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測定，計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 95℃水浴時EP管蓋緊，防止水分散失，待冷卻至室溫后（建議每次實驗后冷卻時間保持一致），再進(jìn)行下一步操作，避免液體飛濺燙傷以及影響試驗數(shù)據(jù)。

實驗實例：

1. 取0.1g黑麥草加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得A對照管=0.128，A測定管=0.667，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.1981x-0.0491，A空白管=0.014，計算ΔA=A測定管-A對照管=0.667-0.128=0.539，x=(0.539+0.0491) ÷0.1981=2.9687，按樣本質(zhì)量計算酶活：