2015-121
轉(zhuǎn)印緩沖液提供了電極之間的電連續(xù)性,其必須是導(dǎo)電的。它還提供了一個(gè)化學(xué)環(huán)境,能維持蛋白質(zhì)的溶解度,又不妨礙轉(zhuǎn)移過程中蛋白質(zhì)吸附到膜上。傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)印緩沖液包含緩沖系統(tǒng)和甲醇。Tris甘氨酸緩沖液,常用于槽轉(zhuǎn)印系統(tǒng)中。這種緩沖液的pH值為8.3,比大多數(shù)蛋白的等電點(diǎn)(pI)要高。在凝膠上分離的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷,向陽極遷移。由于槽內(nèi)的緩沖液是混合的,故轉(zhuǎn)移過程中的離子分布保持相對(duì)恒定。在蛋白測(cè)序應(yīng)用中,建議使用10mMCAPS緩沖液(pH=11)。凝膠電泳緩沖液中殘留的甘氨酸導(dǎo)致蛋白測(cè)...
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2015-121
轉(zhuǎn)印膜:用于蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢驗(yàn)過程的微孔膜。Southernblot:又稱Southern印跡雜交,是研究DNA圖譜的基本技術(shù)。Northernblot:又稱Northern印跡雜交,是檢測(cè)RNA的基本技術(shù)。Westernblot:又稱Western印跡雜交,是蛋白質(zhì)檢測(cè)分析的基本技術(shù)。轉(zhuǎn)印膜在蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢測(cè)過程中應(yīng)用廣泛,不同的轉(zhuǎn)印膜規(guī)格和參數(shù)不同,選擇正確、均一穩(wěn)定的轉(zhuǎn)印膜對(duì)達(dá)到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果起到關(guān)鍵性的作用。常用的三種轉(zhuǎn)印膜:硝酸纖維素膜(NC膜)、帶正電的...
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2015-121
單克隆技術(shù)又名雜交瘤技術(shù)。由G.K?hler和Milstein1975年創(chuàng)立。主要原理是利用產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞雜交融合成雜交瘤細(xì)胞,生產(chǎn)抗體。單克隆抗體的制備過程主要有以下六個(gè)環(huán)節(jié),具體為抗原指標(biāo)、免疫動(dòng)物選擇、免疫程序的確定、免疫、細(xì)胞雜交與選擇培養(yǎng)。單抗制備步驟1、抗原制備制備單克隆抗體的免疫抗原,從純度上說雖不要求很高,但高純度的抗原使得到所需單抗的機(jī)會(huì)增加,同時(shí)可以減輕篩選的工作量。因此,免疫抗原是越純?cè)胶茫瑧?yīng)根據(jù)所研究的抗原和實(shí)驗(yàn)室的條件來決定。2、免疫動(dòng)物...
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2015-121
一、HRP辣根過氧化酶是常見的酶促發(fā)光或顯色的交聯(lián)酶,由于HRP比活高、特異性更強(qiáng)、分子量?。?0kD)、穩(wěn)定性好和作用底物范圍廣的優(yōu)點(diǎn)而得到廣泛使用。HRP的底物種類有不少,主要可以分為化學(xué)發(fā)光底物和生色底物2大類:1.化學(xué)發(fā)光底物:化學(xué)發(fā)光底物主要考慮的是:發(fā)光信號(hào)強(qiáng)弱——發(fā)光信號(hào)當(dāng)然越強(qiáng)越好,強(qiáng)發(fā)光信號(hào)持續(xù)的時(shí)間也是越長越好,還有就是背景低靈敏度高。原理:試劑中的發(fā)光物在辣根過氧化物酶的作用下發(fā)生氧化降解,并發(fā)射波長為428nm的光,此光可經(jīng)x光膠片(放射自顯影片)感光...
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2015-121
物理性狀呈白色或淺黃色結(jié)晶體粉末狀,有刺激氣味,易溶于異丙醇,可溶于水,震蕩時(shí)產(chǎn)生大量泡沫。能與陰離子、非離子、兩性表面活性劑有良好的配位性。具有優(yōu)良的滲透、柔化、乳化、抗靜電、生物降解性及殺菌等性能。作用原理CTAB是一種陽離子去污劑,可溶解細(xì)胞膜,具有從低離子強(qiáng)度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性。它能與核酸形成復(fù)合物:在高鹽溶液中(0.7mol/LNaCl)是可溶的,當(dāng)降低溶液鹽濃度到一定程度(0.3mol/LNaCl)時(shí),從溶液中沉淀,通過離心就可將CTAB-核酸的復(fù)...
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2015-1112
二甲基亞砜物理性質(zhì)二甲基亞砜,英文名稱DMSO。無色粘稠液體。有吸濕性。能與水、乙醇、丙酮、乙醛、吡啶、乙酸乙酯、苯二甲酸二丁酯、二惡烷和芳烴化合物等任意互溶,不溶于乙炔以外的脂肪烴類化合物。二甲基亞砜用途廣泛,可用作溶液和反應(yīng)試劑。DMSO在有機(jī)合成,醫(yī)藥、電子等方面均有應(yīng)用。二甲基亞砜的合成二甲基亞砜一般采用二甲硫醚氧化法制得,由于所用的氧化劑和氧化方式不同,因而有不同的生產(chǎn)工藝。甲醇二硫化碳法甲醇和二硫化碳為原料,以γ-Al2O3作催化劑,先合成二甲基硫醚,再與二氧化氮...
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2015-1112
紅細(xì)胞裂解液裂解是一種比較溫和的紅細(xì)胞去除方法,它能既不損傷有核細(xì)胞又能充分的去除紅細(xì)胞。那么紅細(xì)胞裂解液的原理是怎么樣的呢?裂解液作用原理血紅細(xì)胞表面上有紅細(xì)胞專屬的表面抗原,當(dāng)裂解液中含可以攻擊特定紅細(xì)胞表面抗原的酶的時(shí)候就只會(huì)造成紅細(xì)胞的變形,生物通道擴(kuò)大膨脹裂解,或者引起紅細(xì)胞的變形,而不會(huì)攻擊其他細(xì)胞;另外紅細(xì)胞有自己的電負(fù)性,滲透脆性(通常是一些非酶細(xì)胞裂解液的突破點(diǎn)),懸浮穩(wěn)定性,這都是區(qū)別于其他種類細(xì)胞的區(qū)別點(diǎn)。紅細(xì)胞裂解液就是利用這些特性裂解紅細(xì)胞的。另外紅...
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2015-1112
蘇丹Ⅲ本身是一種有機(jī)物,所以易溶于脂肪,這個(gè)就是化學(xué)中的相似相溶原理。蘇丹Ⅲ在脂肪中的溶解度比在酒精中的溶解度大,當(dāng)用蘇丹Ⅲ的酒精溶液處理含有脂肪的生物組織時(shí),酒精中的蘇丹Ⅲ進(jìn)入脂肪中,將脂肪染成橘黃色。蘇丹Ⅲ適合用于生物脂肪材料的鑒定,可在光學(xué)顯微鏡下看到被染成橘黃色的小粒。蘇丹Ⅲ染色液染色步驟取材:取一粒浸泡過的花生種子,去掉種皮。切片:用刀片在花生子葉的橫斷面上平行切下若干薄片,放入盛有清水的培養(yǎng)皿中待用制片:從培養(yǎng)皿中選取薄的切片,用毛筆蘸取放在載玻片中央;在花生子葉...
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