2016-427
異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用*的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。當(dāng)有乳糖存在時,lac操縱子(元)即可被誘導(dǎo)。在這個操縱子(元)體系中,真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進(jìn)入細(xì)胞,經(jīng)b-半乳糖苷酶催化,轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘?。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白,使蛋白構(gòu)象變化,導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。材料1、誘導(dǎo)表達(dá)材料(1)LB(Luria—Bertani))培養(yǎng)基酵母膏(Yeastextract)5g蛋白胨(Peptone)10gNaCl1...
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2016-427
異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名稱IPTG。為安慰性誘導(dǎo)物,X-gal為生色底物,二者共同用于藍(lán)白斑篩選。IPTG可誘導(dǎo)載體lac操縱子DNA區(qū)段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,該片段可與宿主細(xì)胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實(shí)現(xiàn)基因內(nèi)互補(bǔ)(α互補(bǔ))。IPTG誘導(dǎo)原理先E.coli的乳糖操縱子(元)含Z、Y及A三個結(jié)構(gòu)基因,分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙酰基轉(zhuǎn)移酶,此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調(diào)節(jié)?基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白,后者與O序列結(jié)合,使操縱子(元)受...
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2016-426
CCK-8為細(xì)胞增殖檢測試劑盒,細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征,細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。必須強(qiáng)調(diào)指出,通過細(xì)胞分裂,可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì),平均地分配到兩個子細(xì)胞中去。可見,細(xì)胞增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。CCK8實(shí)驗(yàn)步驟如下。CCK-8實(shí)驗(yàn)步驟1、在96孔板中配置100μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(37℃,5%CO2)。2、向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測物質(zhì)。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間(例如:6、12、24或48小時)。4、向...
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2016-426
CellCountingKit-8簡稱CCK-8試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)。活力計算:.細(xì)胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)]×100A(加藥):具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度...
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2016-426
IPTG是一種作用*的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。IPTG溶液的配制很簡單:在8ml蒸餾水中溶解2gIPTG后,用蒸餾水定容10ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。IPTG的使用方法:先把IPTG配制成24mg/ml(100mM)的水溶液,并進(jìn)行過濾除菌后保存。然后在100ml的瓊脂培養(yǎng)基中,加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal(20?mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100μl的Amp(100mg/...
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2016-425
結(jié)晶紫染色液(CrystalVioletStainingSolution)是一種組織或細(xì)胞染色時常用的可以把細(xì)胞核染成深紫色的染色液。結(jié)晶紫是一種堿性染料,可以和細(xì)胞核中的DNA結(jié)合,從而產(chǎn)生細(xì)胞核染色。結(jié)晶紫染液的配制方法如下:結(jié)晶紫染液的配制結(jié)晶紫(crystalviolet)液:結(jié)晶紫乙醇飽和液(結(jié)晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL,1%草酸銨水溶液80mL將兩液混勻置24h后過濾即成。結(jié)晶紫染液使用方法1.樣品處理a)對于石蠟切片:二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換...
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2016-425
結(jié)晶紫(又叫甲基紫,俗名紫藥水)pH0.5(綠)~2.0(藍(lán))。以冰醋酸作溶劑,用酸滴定液滴定堿時,常用的指示劑為結(jié)晶紫,還有α-萘酚苯甲醇(0.2%冰醋酸溶液,其堿式色為黃色,酸式色為綠色)和喹哪啶紅(0.1%甲醇液,其堿式色為紅色,酸式色為無色)結(jié)晶紫性狀:具有金屬光澤的暗綠色結(jié)晶形粉末。熔點(diǎn)為215℃(分解)。溶于水、乙醇和三氯甲烷,溶液呈紫色。不熔于,濃酸中呈黃色,當(dāng)pH值增大時其顏色變化是黃→綠→藍(lán)→紫.與Sn4+、Tl3+、Au3+和Sb3+的鹵絡(luò)陰離子及MoO、...
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2016-425
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