2021-1019
FITC熒光標(biāo)記抗體是目前較為常用的標(biāo)記抗體的方法,F(xiàn)ITC一般呈黃色、褐色或褐黃色粉末或結(jié)晶,性質(zhì)穩(wěn)定在低溫中能保存數(shù)年。在堿性條件下,F(xiàn)ITC的碳酰胺鍵可與抗體蛋白上的賴(lài)氨酸氨基共價(jià)結(jié)合,形成FITC-蛋白質(zhì)結(jié)合物,即熒光抗體或熒光結(jié)合物。一個(gè)抗體分子上能標(biāo)記15~20個(gè)FITC分子,被標(biāo)記的抗體仍能保持與相應(yīng)抗原結(jié)合的能力,在熒光燈源紫外線(xiàn)或藍(lán)紫光激發(fā)下產(chǎn)生黃綠色熒光,通過(guò)熒光顯微鏡進(jìn)行觀察或利用流式細(xì)胞儀分析,從而對(duì)抗原進(jìn)行定性、定位或定量。下面就跟隨小編一起來(lái)了解其...
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2021-1011
WB實(shí)驗(yàn),蛋白質(zhì)印跡又稱(chēng)免疫印跡,是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。常用于鑒定某種蛋白,并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。實(shí)驗(yàn)原理:一個(gè)基因表達(dá)結(jié)果是產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)(或酶)。因此,檢測(cè)蛋白質(zhì)是測(cè)定基因表達(dá)的主要標(biāo)志,檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法很多,除ELISA法外,也可用與檢測(cè)DNA和RNA相類(lèi)似的吸印方法。而樣本制備是WB實(shí)驗(yàn)的開(kāi)始也是重要的一步,它的操作雖然并不復(fù)雜,卻有很多需要注意的細(xì)節(jié)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要的目標(biāo)蛋白的不同,大致可以分為三種:總蛋白、膜蛋白和核蛋...
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2021-96
白細(xì)胞稀釋液是一種應(yīng)用在血液檢測(cè)過(guò)程中的試劑,白細(xì)胞稀釋液是一種具有酸堿緩沖作用、恰當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度和電導(dǎo)率的電解質(zhì)平衡液。當(dāng)用于稀釋待測(cè)血樣時(shí),其適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度能再一定時(shí)間內(nèi)完整地保持血細(xì)胞原來(lái)的體積,而其合適的電導(dǎo)率能保證獲得與細(xì)胞體積相應(yīng)的脈沖大小,保證測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確。采用的原理是將血液用稀釋液作定量稀釋后,紅細(xì)胞*溶解,注入計(jì)數(shù)池在顯微鏡下計(jì)數(shù),然后計(jì)算出血液中白細(xì)胞數(shù)。白細(xì)胞稀釋液的操作過(guò)程:1、小試管1支,加白細(xì)胞稀釋液0.38ml。2、用微量吸管準(zhǔn)確吸取末稍血20μl...
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2021-831
不同的氨基酸帶有不同化學(xué)性質(zhì)的側(cè)鏈基團(tuán),有的帶有堿性側(cè)鏈,有的帶有酸性側(cè)鏈,由此組成的蛋白質(zhì)具有不同數(shù)目的堿性基團(tuán)和酸性基團(tuán),這些基團(tuán)會(huì)使蛋白質(zhì)在不同的pH溶液中帶有不同的凈電荷,整個(gè)蛋白質(zhì)分子帶正電荷多,即為堿性蛋白。堿性固綠染色液是利用堿性蛋白質(zhì)與帶有負(fù)電荷的堿性染料固綠結(jié)合進(jìn)行染色,細(xì)胞中含量最為豐富的堿性蛋白為組蛋白,主要存在于細(xì)胞核中,因此染色后細(xì)胞核大部分被染成綠色。使用步驟:1.取新鮮血液1滴滴于載玻片一端,推片,室溫晾干。2.涂片浸入70%乙醇中固定5min,...
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2021-827
草酸銨結(jié)晶紫染色液是革蘭氏染色法中的一種成分,主要由草酸銨、結(jié)晶紫、乙醇等組成。革蘭陽(yáng)性菌染色中,細(xì)胞經(jīng)草酸銨結(jié)晶紫染色后再經(jīng)Gram碘液處理,形成不溶性復(fù)合物,該復(fù)合物不能通過(guò)細(xì)胞壁,不易被脫色,所以保持紫色。染色后細(xì)菌與環(huán)境形成鮮明對(duì)比,可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征,而用以分類(lèi)鑒定。草酸銨結(jié)晶紫染色液是一種組織或細(xì)胞染色時(shí)常用的可以把細(xì)胞核染成深紫色的染色液。用于革蘭氏染色。結(jié)晶紫是一種堿性染料,可以和細(xì)胞核中的DNA結(jié)合,可以與細(xì)胞核中的核酸結(jié)合把核染...
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2021-827
“隔壁的實(shí)驗(yàn)室又發(fā)了3篇SCI文章,我們還在處理數(shù)據(jù),這幾家的試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)怎么都不一樣?”小編每當(dāng)聽(tīng)到這句話(huà),每次感受都不同。對(duì)那些努力鉆研數(shù)據(jù)的學(xué)者、那些把青春獻(xiàn)給實(shí)驗(yàn)室的研究生們表示深深的同情。那么,造成試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)不一樣的原因,除了一些實(shí)驗(yàn)操作、實(shí)驗(yàn)環(huán)境等客觀因素外,還有試劑盒質(zhì)量參數(shù),如重復(fù)率、板內(nèi)差、板間差、線(xiàn)性稀釋、回收率等。但是,最重要的影響因素可能是作為檢測(cè)標(biāo)尺的標(biāo)準(zhǔn)品。所以,下面我們就揭曉影響不同ELISA試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)的差異和關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)品的幾個(gè)疑惑。不同...
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2021-824
熒光蛋白上樣緩沖液在電泳前的樣品處理階段對(duì)SDS-PAGE的蛋白樣品進(jìn)行預(yù)染,標(biāo)記上熒光。實(shí)驗(yàn)完成以后,凝膠中或轉(zhuǎn)膜后的蛋白條可直接通過(guò)紫外燈、LED燈或其他數(shù)字成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察和分析,無(wú)需染色脫色。熒光蛋白上樣緩沖液靈敏度高比銀染高。穩(wěn)定性強(qiáng),背景低??蓪?duì)所有蛋白進(jìn)行染色,不影響蛋白的遷移率與電泳圖譜。電泳過(guò)程中,游離的染料分子與溴酚藍(lán)的遷移速率一致,跑膠結(jié)束時(shí)移至凝膠末端,背景干凈。熒光蛋白上樣緩沖液非常適合用于追蹤蛋白表達(dá)純化以及Westernblot的SDS-PAGE...
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2021-819
全蛋白提取試劑盒可用于從哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取全蛋白,用含有蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液勻漿裂解組織或細(xì)胞,提取過(guò)程簡(jiǎn)便高效。獲得的全蛋白可用于WesternBlot、IP等后續(xù)研究,但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究。全蛋白提取試劑盒具有哪些優(yōu)勢(shì)?1.提取的蛋白質(zhì)包括膜、核、核基質(zhì)和胞質(zhì)蛋白,而且更大限度保持蛋白質(zhì)活性。2.可以用于培養(yǎng)細(xì)胞,有可以用于動(dòng)物組織蛋白質(zhì)的提取。3.避免蛋白酶和磷酸酶對(duì)蛋白質(zhì)的降解,保持蛋白質(zhì)的完整性和天然活性。4.不需要超速度離心,可以同...
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